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條件性Pfkfb3過表達小鼠模型

健明迪檢測提供的條件性Pfkfb3過表達小鼠模型,討論與結論 該模型通過長期觀察普通狼瘡小鼠模型,待其到40周齡時,檢測其dsDNA等,結合皮膚癥狀變化,來確定慢性狼瘡皮膚病模型的建立,具有CMA,CNAS認證資質。
條件性Pfkfb3過表達小鼠模型
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討論與結論

該模型通過長期觀察普通狼瘡小鼠模型,待其到40周齡時,檢測其dsDNA等,結合皮膚癥狀變化,來確定慢性狼瘡皮膚病模型的建立。目前國際上尚欠缺類似模型,為研究狼瘡皮膚病發(fā)病機制提供了工具。

生物安全性

模型動物飼養(yǎng)在武漢大學人民醫(yī)院動物房SPF級動物實驗室,實驗動物使用許可證SYXK(鄂)2015-0027。

(1)建筑特點

門采用專用凈化密閉門并配備觀察窗。單向走道呈順時針走向設計。屏障系統(tǒng)內共有大鼠飼養(yǎng)室1間,小鼠飼養(yǎng)室3間,隔離觀察室1間,實驗準備室1間,潔物存放室1間,清洗消毒室1間。此外,屏障系統(tǒng)外配有監(jiān)控室、機房和配電室等。

(2)設計參數

室內溫度:20~26°C;日溫差:≤4°C;相對濕度:40%~70%;換氣次數:15~20次/h;氣流速度:≤0.2m/s;壓強梯度:20~50Pa;空氣潔凈度:7級;菌落數:≤3個/皿;氨濃度:≤14mg/m3;噪聲:≤60dB;Z低工作照度:≥200lx;動物照度:15~20lx;晝夜明暗交替時間:12/12h。

(3)通風和空調系統(tǒng)

動物實驗室采用全新風中央空調通風系統(tǒng)。空氣經過初、中、三級過濾器后進入實驗室內環(huán)境。

(4)照明系統(tǒng)

一更、淋浴、二更、氣閘、清潔走道、潔物存放處、污物走道、緩沖間和清洗消毒間、動物飼養(yǎng)室、實驗準備間、隔離觀察室和功能實驗室等安裝有手動和自動開關,根據實際需要,調節(jié)控制室內照明燈。未啟用房間、清潔走道、潔物存放處、污物走道等在每日中午12點和晚上8點開啟紫外線燈照射1h。

(5)通訊系統(tǒng)

因為SPF級動物實驗室的環(huán)境和設施具有特殊要求,人員進入后不能隨意出入,而室內外的聯系又十分重要,故室內各房間均安裝內部電話機,按照房間順序編排電話號碼,各室內電話可相互連通,并均與監(jiān)控室總機保持聯系,保證實驗室內外信息的及時溝通。

(6)監(jiān)控系統(tǒng)

對SPF級動物實驗室的出入口、走道、實驗動物飼養(yǎng)室、功能操作室等重要位置均安裝了可作270°旋轉的攝像機,能夠及時了解設施的運行狀態(tài);也能有效督促實驗人員執(zhí)行科學的操作規(guī)程,避免人為因素造成室內環(huán)境和設施的污染;并對整個實驗期間的動物狀態(tài)和反應進行觀察,減少對動物的滋擾。

(7)供水系統(tǒng)

SPF級實驗動物飲用水以純凈水為宜。本實驗室采用管道供水,將處理后的純凈水用塑膠管道輸送到屏障系統(tǒng)內實驗準備室,設置接水槽,為實驗動物供應滅菌的飲用水和屏障系統(tǒng)內用水。要經常更換和清洗輸水管道,清洗籠具的用水添加適當比例的84消毒液。

(8)供電系統(tǒng)、警報系統(tǒng)和消防設施

SPF級動物實驗室要求全天候不間斷供風和供電,如果出現故障,不能及時發(fā)現和處理,就可能導致環(huán)境設施的污染、動物感染或死亡,造成嚴重后果。因此應對SPF級動物實驗室使用獨立穩(wěn)定的供電系統(tǒng),并配備有應急電源。在中央空調機房控制室安裝風機故障警報系統(tǒng),以便及時檢修和維護,保證設施的安全運行。

(9)消毒滅菌設備

為防止外界物品進入SPF級動物實驗室時所攜帶的細菌污染室內環(huán)境和造成動物交叉感染,按照不同物品的特性,進行紫外線照射消毒、渡槽消毒液消毒或專用的機動門真空滅菌器消毒。

(10)動物飼養(yǎng)籠具

飼養(yǎng)大、小鼠的籠具聚碳酸脂材料的塑膠籠具,具有高透明、耐高壓、耐高溫、耐酸堿等特點。通用的不銹鋼籠具長、寬、高分別為40、30、20cm,適用于單籠飼養(yǎng)有特殊要求的實驗動物,配有底盤和食槽,確保實驗動物有充足的采食和活動空間,同時也保證室內環(huán)境的清潔。

(11)墊料的選擇和使用

在使用塑膠墊料時,墊料是大小鼠直接接觸的鋪墊物,起到吸濕、保暖和造窩的作用。墊料的好壞直接影響到大小鼠術后的恢復、生長發(fā)育和繁殖性能。目前,所使用的墊料主要有玉米秸墊料、刨花墊料。

(12)飼料配制

大小鼠的生產型飼料和維持型飼料必須嚴格按照國家標準,進行科學配制生產。每半年檢測一次飼料的微生物指標和有效營養(yǎng)成分指標,保證飼料的質量。

評價驗證

Pfkfb3基因編碼的蛋白具有6-磷酸果糖-2-激酶活性,催化合成果糖-2,6-二磷酸(F2,6BP),以及果糖-2,6-二磷酸酶活性,催化F2,6BP的降解。該蛋白是細胞周期進程和防止細胞凋亡所必需的,也參與了自噬過程。PFKFB3的表達在許多人類癌癥中都發(fā)生了明顯上調,在促進休眠轉移細胞重新激活增殖程序和復發(fā)中發(fā)揮關鍵作用。

制備方法

F0代構建:

研究背景

Pfkfb3基因編碼的蛋白屬于雙功能蛋白家族,是一種前糖酵解酶,參與果糖-2,6-二磷酸的合成和降解,果糖-2,6-二磷酸是一種控制真核生物糖酵解的調節(jié)分子。PFKFB3蛋白具有6-磷酸果糖-2-激酶活性,催化合成果糖-2,6-二磷酸(F2,6BP),以及果糖-2,6-二磷酸酶活性,催化F2,6BP的降解。該蛋白是細胞周期進程和防止細胞凋亡所必需的,也參與了自噬過程。它作為周期蛋白依賴性激酶1的調節(jié)因子,將葡萄糖代謝與腫瘤細胞的增殖和生存聯系起來。PFKFB3的表達在許多人類癌癥中都發(fā)生了明顯上調,在促進休眠轉移細胞重新激活增殖程序和復發(fā)中發(fā)揮關鍵作用。

模型信息

中文名稱:條件性Pfkfb3過表達小鼠模型

英文名稱:Pfkfb3 conditional expressing mouse model

類型:代謝性疾病動物模型

分級:NA

用途:用于代謝相關疾病研究。

研制單位:中國醫(yī)學科學院醫(yī)學實驗動物研究所

保存單位:中國醫(yī)學科學院醫(yī)學實驗動物研究所

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