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條件性ZIKV-NS2A過表達(dá)小鼠模型

健明迪檢測(cè)提供的條件性ZIKV-NS2A過表達(dá)小鼠模型,討論與結(jié)論 1.病毒滴度的變化:接種病毒后,動(dòng)物肺組織PVM?RT-PCR檢測(cè)可檢出病毒,病毒滴度在感染后3天達(dá)到高峰,并可維持至7日,隨后滴度下降,具有CMA,CNAS認(rèn)證資質(zhì)。
條件性ZIKV-NS2A過表達(dá)小鼠模型
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討論與結(jié)論

1. 病毒滴度的變化:接種病毒后,動(dòng)物肺組織PVM?RT-PCR檢測(cè)可檢出病毒,病毒滴度在感染后3天達(dá)到高峰,并可維持至7日,隨后滴度下降。

2. 感染動(dòng)物體重較之未感染動(dòng)物體重下降,動(dòng)物多出現(xiàn)豎毛,弓背等癥狀。嚴(yán)重者體重下降,行動(dòng)出現(xiàn)遲緩,耳及尾可見紫紺,震顫,處于瀕死狀態(tài)。用于藥效評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)時(shí),應(yīng)控制感染劑量,降低因感染出現(xiàn)的急性死亡(4日內(nèi))。6~7日的死亡率可作為藥效評(píng)價(jià)的指標(biāo)。

3. 病理損傷以充血、出血、肺組織水腫以及炎細(xì)胞浸潤為標(biāo)準(zhǔn),應(yīng)測(cè)定肺間隔,以及肺通氣水平,進(jìn)而評(píng)估肺呼吸能力。

4. 炎癥因子重點(diǎn)關(guān)注IL-1β,IL-6,IL-18,MCP-1,IFN-γ等。

進(jìn)行人類RSV 肺炎感染研究,國內(nèi)外推薦使用PVM做替代實(shí)驗(yàn)。PVM的毒株不同,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的品系不同,動(dòng)物的臨床表型也會(huì)存在差異。本模型的表型與國外進(jìn)行的模型研究表型相似,在急性期的死亡率較低,有較長(zhǎng)的臨床治療的窗口,可用于免疫治療的療效評(píng)價(jià)。

生物安全性

PVM為低于人間傳染病名錄三級(jí)安全風(fēng)險(xiǎn)的病原,人類感染的風(fēng)險(xiǎn)低,但不排除對(duì)免疫功能缺陷者的致病性。

PVM是嚙齒類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物必須排除的病原體,對(duì)動(dòng)物有致病性。會(huì)干擾其他實(shí)驗(yàn)研究。

鑒于此,此感染實(shí)驗(yàn)必須在BSL-2級(jí)以上的生物安全實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行病原學(xué)實(shí)驗(yàn),在ABSL-2實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

評(píng)價(jià)驗(yàn)證

ZIKV NS2A在招募病毒RNA、結(jié)構(gòu)蛋白prM/E和病毒NS2B/NS3蛋白酶到病毒粒子組裝位點(diǎn)并協(xié)調(diào)病毒粒子形態(tài)形成方面發(fā)揮了核心作用,是寨卡病毒粒子組裝的重要功能分子。

制備方法

F0代構(gòu)建:

研究背景

寨卡病毒(ZIKV)屬于屬黃病毒科黃病毒屬,病毒顆粒呈球形,直徑40-70nm。孕婦感染可導(dǎo)致ZIKA綜合征,造成新生兒的小頭畸形;成人感染還可導(dǎo)致格林-巴利綜合征。寨卡病毒是單股正鏈RNA病毒,基因組長(zhǎng)約10.8kb,含一條單一開放讀碼框。病毒蛋白由一個(gè)單一的多蛋白前體,經(jīng)宿主蛋白酶和病毒蛋白酶切而成,包括3個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白(C、prM/M、E)和7個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白(NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B、NS5)。非結(jié)構(gòu)蛋白具有絲氨酸蛋白么、RNA解旋酶和RNA依賴RNA聚合酶功能。寨卡病毒主要通過病毒感染的伊蚊類蚊媒叮咬傳播;亦可通過母嬰傳播,包括宮內(nèi)感染和分娩時(shí)感染;也可通過輸血和性傳播。寨卡病毒感染的潛伏期數(shù)日至一周,約20%感染者出現(xiàn)臨床癥狀,典型病癥表現(xiàn)為:急性發(fā)熱伴斑丘疹、關(guān)節(jié)痛或結(jié)膜炎、肌痛和頭痛。臨床表現(xiàn)一般較輕,持續(xù)數(shù)天至一周,重癥病例少見,病死率極低。但是孕婦在妊娠期感染寨卡病毒可能會(huì)引起胎兒先天性小頭畸形或胎死宮內(nèi)。寨卡病毒粒子組裝的分子機(jī)制在很大程度上是未知的。有研究表明,ZIKV NS2A在招募病毒RNA、結(jié)構(gòu)蛋白prM/E和病毒NS2B/NS3蛋白酶到病毒粒子組裝位點(diǎn)并協(xié)調(diào)病毒粒子形態(tài)形成方面發(fā)揮了核心作用。一種破壞這些相互作用的突變不會(huì)顯著影響病毒RNA復(fù)制,但會(huì)選擇性地破壞病毒粒子的組裝,表明了這些相互作用在病毒形態(tài)發(fā)生中的特定作用。研究還發(fā)現(xiàn),ZIKV RNA的3'UTR可能作為一種“招募信號(hào)”,通過與NS2A結(jié)合進(jìn)入病毒粒子的組裝位點(diǎn)。在病毒粒子組裝位點(diǎn)C-prM-E協(xié)調(diào)切割后,NS2A可能將病毒RNA呈遞給C蛋白形成核衣殼,然后被prM/E蛋白包膜。

模型信息

中文名稱:條件性ZIKV-NS2A過表達(dá)小鼠模型

英文名稱:ZIKV-NS2A conditional expressing mouse model

類型:Zika病毒模型

分級(jí):NA

用途:用于Zika病毒相關(guān)研究。

研制單位:中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所

保存單位:中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所

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