動(dòng)物癥狀觀察：

表現(xiàn)為體重減輕、弓背豎毛，在回輸后的一個(gè)月后死亡。

實(shí)驗(yàn)中涉及動(dòng)物的操作程序已經(jīng)得到中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用與管理委員會(huì)的批準(zhǔn)(ILAS-GC-2012-001)。

1.行為學(xué)表型:動(dòng)物會(huì)出現(xiàn)肢體運(yùn)動(dòng)失調(diào)、震顫等一系列行為學(xué)改變。在術(shù)后 2 h , 1 、2 、3 、7 、14 、21 、28 、35 d 內(nèi),使用經(jīng)過修改 、細(xì)化的 Kito 靈長(zhǎng)類動(dòng)物神經(jīng)功能損害評(píng)分表對(duì)模型動(dòng)物進(jìn)行意識(shí)、骨骼肌肉協(xié)調(diào)、感覺系統(tǒng) 、意識(shí)系統(tǒng)的行為學(xué)相關(guān)測(cè)試進(jìn)行評(píng)價(jià).

2.影像學(xué)表型 : 動(dòng)物在進(jìn)行影像學(xué)檢查時(shí)會(huì)出現(xiàn)明顯的影像學(xué)改變，在造模后 24 h 進(jìn)行 PET 掃描，對(duì)病灶大小進(jìn)行觀察記錄。

3.組織病理學(xué)表型:動(dòng)物造模部位會(huì)出現(xiàn)梗死等病理學(xué)變化。在造模后2 、5 周后分別處 死動(dòng)物 2 只動(dòng)物 ,經(jīng)生理鹽水及 10 %中性福爾馬林 心臟灌注后, 取腦組織進(jìn)行固定、切片 , 通過 HE 染 色、特殊染色等染色方法觀察梗死灶周圍的病理學(xué)改變。

動(dòng)物清醒后表現(xiàn)出不同程度的腦缺 血癥狀與體征。 病理學(xué)檢查可見明顯的壞死灶。 壞死灶周圍腦組織水腫, 神經(jīng)細(xì)胞變性壞死。

A 造模12小時(shí)梗死灶面積3.6*11.6mm；B造模后12小時(shí)，腦組織內(nèi)毛細(xì)血管擴(kuò)張充血，腦組織水腫； C造模后12小時(shí)，大腦皮質(zhì)局部水腫，神經(jīng)細(xì)胞變性壞死，大量吞噬棕黃色色素的泡沫細(xì)胞浸潤(rùn)； D造模后35天梗死灶面積1.2*6mm ；E造模35天后腦組織壞死，泡沫細(xì)胞浸潤(rùn)；F造模35天后腦組織壞死區(qū)毛細(xì)血管內(nèi)黃色結(jié)晶，泡沫細(xì)胞浸潤(rùn)。

麻醉后的動(dòng)物采用俯臥位固定在立體定位儀上 ,顱頂區(qū)備皮 ,常規(guī)消毒手術(shù)區(qū)皮膚,沿矢狀面在顱頂正中切開長(zhǎng)約 4 ～ 5 cm 的切口 ,逐層分離皮下組織、帽裝肌腱 、肌肉、骨膜 , 用擴(kuò)張器充分暴露手術(shù)視野。使用便攜式顱鉆在頂 骨裂處進(jìn)行顱骨鉆孔 , 以鉆透顱骨 , 達(dá)硬腦膜為止 (有落空感)。鉆好的孔為橢圓形 ,大小為 3.0 cm × 1.5 cm , 其長(zhǎng)軸與顱骨正中線垂直。將冷光源發(fā)生 器的發(fā)光口固定與顱頂開口處。周圍用浸透生理鹽水的無菌紗布覆蓋傷口 。用鋁箔紙遮蓋動(dòng)物眼睛, 避免光化學(xué)反應(yīng)對(duì)動(dòng)物視網(wǎng)膜的損害。靜脈注射玫 瑰紅 B35 mg kg ,從注射完畢開始計(jì)時(shí) , 5 min 后打開 光源 ,電子光強(qiáng)選擇 6 ,機(jī)械光強(qiáng)選擇, 照射 10 min 。 第一次注射后 10 min 第二次注射玫瑰紅 B , 濃度與 第一次相同。照射完畢后,向顳側(cè)移動(dòng)光源發(fā)光口, 在第二點(diǎn)照射 10 min 。縫合骨膜 、皮膚。肌肉注射青霉素 40 萬 單位預(yù)防感染 。

腦血管疾病嚴(yán)重危害人類健康, 是目前人類發(fā)病率最高的疾病之一 ,并常導(dǎo)致殘疾, 給社會(huì)和家庭帶來沉重負(fù)擔(dān)。在腦血管疾病中以缺血性疾病的 發(fā)病率占據(jù)首位 。血管缺血性損傷是由于各種原因誘發(fā)腦血管栓塞引起腦組織缺血、缺氧 ,進(jìn)一步誘發(fā)腦神經(jīng)細(xì)胞變性、壞死 ,最終導(dǎo)致神經(jīng)功能障礙 、喪失的一類疾病。在臨床上 , 引起缺血性損害的原因多種多樣。由于缺血是一種供血異常, 血管因素在其中發(fā)揮重要作用。

獼猴在進(jìn)化上與人類高度同源，種屬差異小，在組織結(jié)構(gòu)和生理特征上與人類極為相似，這一突出特點(diǎn)奠定了恒河猴動(dòng)物在藥物生產(chǎn)和評(píng)價(jià)、功能和進(jìn)化比較基因組學(xué)研究、人類重大疾病模型復(fù)制和應(yīng)用、再生醫(yī)學(xué)等研究領(lǐng)域中不可或缺的優(yōu)勢(shì)地位